双光束紫外可见分光光度计当以空白试剂为参比调节仪器零点时，比色皿窗材料的吸收、内外窗面的散射以及溶剂的吸收等都被抵消，所得吸光度值*由显色溶液中待测离了浓度所决定。此时吸光度值与试液浓度一般呈线性关系。吸光度值与测定浓度不成直线关系，发生向下弯曲(负偏离)或向上弯曲(正偏离)的现象而偏离朗伯一比尔定律的主要原因如下。

　　(1)非单色光的影响 双光束紫外可见分光光度计使用连续光源和分光器分光，不可能得到真正理想的单色光；为保证在测量中能得到充分的光强，仪器必须保持一定的狭缝宽度。由狭缝射出后投射到被测物质上的光，是一个有限宽度的谱带——光谱通带。随光谱通带宽度的增大，吸收光谱的分辨率降低，并偏离朗伯一比尔定律。

　　(2)非吸收光的影响 当来自出射狭缝的光的光谱通带宽度大于吸收光谱谱带时，投射在被测物质上的光就含有非吸收光。这不仅能使灵敏度降低，且能使校准曲线向横坐标轴弯曲而偏离朗伯一比尔定律。

　　(3)非平行光的影Ⅱ向 当入射光与比色皿的光学面不垂直时，通过被测物质的实际光程就大于比色皿的厚度。这种情况所造成的影响很小，一般可忽略不计。

　　(4)散射的影响 双光束紫外可见分光光度计当被测物质不均匀，其巾含有微小颗粒物，如悬浮物或胶态粒子等散射质点时，入射光通过该物质就会使部分光被散射而损失，从而减小了透射光的性度，增大了实际吸光度，导敛偏离朗伯一比尔定律。

　　(5)荧光的影响 某些物质吸收光后能再新辐射出波长和入射光波长相近的荧光而导致朗们一比尔定律失效。

　　(6)化学反应的影响 在被测溶液中待测组分发发生解离、缔合、光化等作用，或与溶剂相互作都将使待测组分的吸收曲线发生明显的改变，如吸收峰的形状、位置、强度以及精密结构都会发生变化，从而导致偏离朗伯一比尔定律。

　　(7)溶剂的影响 双光束紫外可见分光光度计溶剂对吸收光潜在的影响颇为要。幅射能引起某化合物的分解而导致偏离朗们比尔定律。